低剂量力达霉素对小鼠P19胚胎癌细胞的生长抑制作用及其机制

目的：探讨低剂量力达霉素对小鼠P19胚胎癌细胞生长的影响及其可能的作用机制，为以肿瘤干细胞为靶点的肿瘤治疗提供依据。方法：体外培养P19细胞，实验分非加药组、阿霉素组和力达霉素组。MTT法检测力达霉素处理P19细胞后的剂量曲线和时间曲线。流式细胞术进一步确定力达霉素和阿霉素处理过的P19细胞的非凋亡剂量，并检测其细胞周期改变。Real-timePCR、Westernblotting和免疫荧光化学技术检测力达霉素和阿霉素处理过的P19细胞中转录因子Oct4mRNA和蛋白质的表达水平。结果：MTT法分析结果显示,力达霉素和阿霉素分别处理P19细胞后的半数有效抑制浓度(IC50)为1×10－11mol/L和0.5×10-6mol/L，从0.001nmol/L-1到0.1nmol/L-1浓度范围内的力达霉素处理细胞120h后，仍可有效抑制小鼠P19胚胎癌细胞生长。流式细胞术分析表明,非凋亡剂量0.01nmol/L-1力达霉素阻滞P19细胞生长发生在G1期，而0.5μmol/L-1阿霉素阻滞P19细胞生长则发生在G2期。Real-timePCR、Westernblotting和免疫荧光化学实验均揭示低剂量力达霉素下调P19细胞中的Oct4表达，而阿霉素无此作用。结论：低剂量力达霉素抑制P19细胞生长可能与其下调了胚胎干细胞基因Oct4有关。