Smad2/3/4真核表达质粒的构建及重组蛋白表达

目的:构建pcDNA3.1myc-HisA-Smad2/3/4真核表达质粒，证实融合蛋白在细胞内表达。方法:以pcDNA3.1-Smad2/3和pGEX2T-Smad4质粒为模板，设计特异性引物，PCR扩增Smad2/3/4全长编码基因，亚克隆至含有pcDNA3.1myc-HisA标签的真核表达载体中。将构建的重组质粒测序并转染到人胚胎肾细胞HEK293中，提取细胞蛋白进行Westernblotting检测。结果：Smad2/3/4全长基因序列克隆到真核表达载体pcDNA3.1myc-HisA中，酶切鉴定片段为1401、1275和1656bp。Westernblotting检测到融合蛋白pcDNA3.1myc-HisA-Smad2/3/4的表达。结论:成功构建pcDNA3.1myc-HisA-Smad2/3/4真核表达质粒，同时鉴定其融合蛋白的表达。