大鼠肺移植供肺保存过程中细胞死亡类型的动态变化

目的通过对供肺保存过程中细胞凋亡和细胞坏死的动态变化的研究，探讨建立一种可以准确评估供肺保存质量的实验模型方法清洁级健康雄性Sprague-Dawley大鼠42只，体重250～300g，预先分为7组，每组6只。整体获取心肺，置于4℃的新鲜制备的低钾右旋糖苷液（LPD）溶液中保存。保存不同的时间（0、2、4、6、12、18、24h）后，通过主肺动脉向肺内灌注20mL的500mmol/L锥虫蓝、20mL生理盐水和10mL4％的多聚甲醛后固定，蜡块包埋后按4mm层厚切片。在光学显微镜下观察锥虫蓝染色情况；另一方面作TUNEL染色和Hoechst染色，在荧光显微镜下观察，严格按照盲法原则由两位研究者对死亡细胞进行分类计数。结果随着供肺低温保存时间的延长，细胞死亡数量上逐渐增加，而且细胞的死亡类型上发生动态变化。在低温保存的条件下，4h组才开始有少量的坏死细胞出现，随着保存时间的逐渐延长，细胞坏死也逐渐增加，在供肺保存18小时以上组，坏死细胞显著增加；而细胞的凋亡开始于供肺保存2h组，在供肺保存12h组达到高峰，约占所有细胞的9％，在供肺保存18h组基本消失。结论通过对不同保存时间的供肺进行锥虫蓝、TUNEL、Hoechst三染色的方法，能很好的显示供肺保存后的细胞凋亡和坏死的情况。