叶酸缺乏对斑马鱼体轴发育的影响

目的构建叶酸缺乏斑马鱼模型，观察叶酸缺乏斑马鱼胚胎的体轴发育情况，初步探讨叶酸缺乏导致胚胎体轴发育异常的机制。方法分别应用二氢叶酸还原酶（dhfr）抑制剂甲氨蝶呤（MTX）以及二氢叶酸还原酶（dhfr）基因阻抑技术，通过下调二氢叶酸还原酶功能构建叶酸缺乏斑马鱼模型。在胚胎发育至17hpf时在显微镜下观察胚胎的体轴偏移情况。利用特异性探针通过胚胎整体原位杂交的方法标记肝脏、胰脏以及心脏，以观察其位于中线两侧的位置。利用胚胎整体原位杂交和Real-timePCR的方法检测与体轴发育密切相关的Nodal信号通路下游因子ntl和gsc的表达情况。结果叶酸缺乏组一定比例胚胎存在体轴偏移以及肝脏、胰脏和心脏左右轴异位。叶酸缺乏组Nodal信号通路下游因子ntl以及gsc的表达强度无明显变化，但表达的空间模式发生改变，提示轴中胚层发育紊乱。结论叶酸缺乏可导致斑马鱼胚胎体轴发育异常以及轴中胚层发育紊乱，但对Nodal信号通路无明显干扰作用。