兔膀胱平滑肌细胞的分离培养与鉴定

目的建立分离、培养高纯度兔膀胱平滑肌细胞的方法，并进行细胞学鉴定与分析。方法正常成年新西兰白兔共6只，运用显微手术器械在肉眼下仔细剔除膀胱黏膜层及浆膜层后，完整分离膀胱平滑肌层。然后以酶分离法获取兔膀胱平滑肌细胞，体外原代和传代培养分离细胞。在倒置显微镜下观察细胞形态及生长状况，同时进行细胞爬片H-E染色和透射电镜等形态学观察分析，并应用免疫荧光染色平滑肌特有的α-肌动蛋白进行细胞学鉴定分析。最后根据细胞计数绘制细胞生长曲线和增殖曲线。结果24h可见膀胱平滑肌细胞贴壁生长，7d可进行传代，传至第10代时细胞仍迅速生长，倒置显微镜下观察细胞相互交叉、重叠生长形成多层，高低起伏呈“谷和峰”样结构，至第12代时，细胞开始变形，至第15代时细胞已失去平滑肌细胞的典型形态特点，细胞生长杂乱且不规则，至第20代时细胞已死亡。以第4代细胞进行形态学细胞爬片H-E染色和透射电镜观察分析，以及平滑肌特有的α-肌动蛋白免疫荧光染色分析均证实，该分离培养的细胞为膀胱平滑肌细胞，且纯度高达100%。结论酶分离法在短时间内成功培养大量高纯度的膀胱平滑肌细胞，为深入研究膀胱平滑肌细胞的病理生理及分子生物学奠定了基础。