利用Tet-Off表达系统构建鞘磷脂合酶可调控高表达的Huh7肝癌细胞

目的利用Tet-Off表达系统构建鞘磷脂合酶（sphingomyelinsynthase，SMS）可被Dox调控高表达的Huh7细胞，为进一步探讨SMS活性升高致动脉粥样硬化的机制打下基础（建立细胞模型）。方法首先将Tet-Off调控质粒转染Huh7细胞构建Huh7-tTA细胞，然后再将含外源性人SMS基因（hSMS）的PTREE2hyg质粒转染Huh7-tTA细胞，经分离纯化成功构建可调控表达hSMS的Huh7单克隆细胞（命名为SMS细胞，SMS1和SMS2）。为了便于检测外源性hSMS，利用FLAG标记hSMS（SMS-FLAG）。结果SMS细胞表达SMS-FLAG受不同剂量Dox调控，SMSmRNA测定结果显示:0ng/mLDox剂量组较0.01ng/mL和100ng/mLDox组均有显著升高（P<0.05和P<0.001）；0.01ng/mLDox组较100ng/mLDox组也有显著升高（P<0.05）。SMS蛋白测定结果相似于SMSmRNA结果。SMS酶活性测定结果显示0ng/mLDox组显著高于100ng/mLDx组（P<0.001），而对照组（Huh7-tTA）、100ng/mLDox组和野生型Huh7细胞组之间差异均无统计学意义（P>0.05）。结论利用Tet-Off体系成功构建SMS高表达可调控Huh7细胞，SMS细胞SMS高表达受Dox剂量调控。