生物素标记法分析MCF-10A细胞质膜蛋白质

目的优化细胞膜蛋白分离纯化技术，以期实现快速、高效分析细胞膜蛋白质。方法本文以乳腺细胞系MCF-10A为模型，用sulfo-NHS-LC-biotin标记完整的活细胞，使细胞表面蛋白生物素化，细胞裂解后利用链亲和素对膜蛋白进行分离富集，再洗脱膜蛋白，达到分离纯化的目的。利用液相层析偶合串联质谱技术（liquidchromatography-tandemmassspectrometry，LC-MS/MS）鉴定提取得到MCF10A膜蛋白。结果sulfo-NHS-LC-biotin浓度为0.2mg/mL时得到的标记纯化膜蛋白最多，可作为标记最适浓度。利用这种方法鉴定出256个蛋白质，生物信息学分析表明其中膜蛋白占63%，比传统膜蛋白分离纯化方法得到的结果好。结论这种方法省去常规分离膜蛋白时所需的超速离心，具有操作简单、可行性高、平行性高的特点，有望用于规模化肿瘤膜蛋白的差异比较，为肿瘤早期诊断及治疗提供新的靶标。