组织因子途径抑制物-2的时间分辨荧光免疫测定方法的建立及评价

目的建立测定血液中组织因子途径抑制物-2（tissuefactorpathway-2，TFPI-2）含量的时间分辨荧光免疫测定方法（time-resolvedfluorescenceimmunoassay，TRFIA）。方法以兔抗人TFPI-2多克隆抗体作为固相抗体，单克隆抗体3C8作为第一抗体，原核表达的人TFPI-2作为标准品，Eu3+标记的羊抗鼠单克隆抗体作为检测抗体，采用双抗体夹心法建立TFPI-2TRFIA分析系统，并与酶联免疫吸附法（ELISA）进行比较。结果自制TFPI-2TRFIA试剂标准曲线的线性范围为0.1~50ng/mL，灵敏度为0.048ng/mL，批内和批间变异系数均≤8.39%。应用该方法测定56例冠状动脉粥样硬化性心脏病（coronaryatheroscleroticheartdisease，CHD）患者及24例正常体检者血浆中的TFPI-2分别为（10.58±7.12）和（8.53±2.32）ng/mL。结论我们建立的TFPI-2TRFIA分析方法与ELISA相比灵敏度更好，定量检测结果能够敏感准确地反映血液内TFPI-2的浓度变化，特异性和稳定性均符合要求。