携带IL-24的溶瘤腺病毒作用于乳腺癌的体外实验研究

目的构建携带IL-24基因的溶瘤腺病毒CNHK600-IL-24，评估CNHK600-IL-24在体外对乳腺癌细胞的杀伤能力。方法将IL-24基因插入腺病毒穿梭载体SG502-ΔCR2，与5型腺病毒骨架载体pPE3共转染至人胚肾293细胞，获得溶瘤腺病毒CNHK600-IL-24。荧光显微镜观测及病毒体外增殖实验测评病毒在乳腺癌细胞MDA-MB-231和正常成纤维细胞MRC-5中的增殖情况；MTT法检测不同MOI值的病毒对两种细胞的抑制效应；ELISA法检测病毒感染细胞后上清液中IL-24的含量；Westernblot法检测细胞内的IL-24蛋白；流式细胞检测细胞的凋亡情况。结果CNHK600-IL-24经测序及PCR鉴定，病毒滴度为1.9×1010pfu/mL。CNHK600-IL-24感染MDA-MB-231细胞后表现出强大的增殖、复制能力，而在MRC-5细胞内增殖并不明显；CNHK600-IL-24在很低的浓度就能对MDA-MB-231细胞产生明显的杀伤效应，而对MRC-5细胞的杀伤作用明显减弱；CNHK600-IL-24感染MDA-MB-231细胞后，IL-24蛋白的表达明显增多，而感染MRC-5细胞后产生的IL-24维持在很低的水平。流式细胞检测发现，病毒引起的MDA-MB-231细胞明显凋亡而MRC-5细胞的凋亡率很低。结论本研究成功构建高滴度的溶瘤腺病毒CNHK600-IL-24，该病毒具有在乳腺癌细胞中特异性增殖并杀伤肿瘤细胞的能力。