人结肠腺癌细胞系Caco-2单细胞层短期培养法及其评价

目的利用丁酸建立一种短期培养人结肠腺癌细胞系Caco-2(humancolonadenocarcinomacellline)单细胞层的方法。方法使用不同成分的含丁酸培养基培养Caco-2单细胞层,通过显微镜观察细胞形态学特点、测定跨膜电阻(transepithelialelectricalresistance,TEER)和荧光黄通透量等指标,评价其完整性;通过检测碱性磷酸酶(alkalinephosphatase,AKP)活性,评价其细胞极化程度;通过RT-PCR评价其对主要药物转运蛋白表达的影响。结果使用短期培养法获得的Caco-2单细胞层形态完整,TEER>500Ω·cm2,漏出标志物荧光黄表观分配系数(apparentpermeability,Papp)<5×10-5cm/s,表明单细胞层的完整性良好。同时肠腔侧(apical,AP)AKP活性显著升高,表明单细胞层出现明显的极性分化。短期培养与21天培养所得的Caco-2单细胞层中,药物转运蛋白P-糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)和多药耐药相关蛋白2(multidrugresistance-associatedprotein2,MRP2)的RNA表达水平基本一致。结论含丁酸的无血清培养基可促进Caco-2单细胞层的快速形成,利用该法建立的Caco-2细胞模型符合各项指标的要求,可用于研究口服药物转运的吸收机制。