外源性1-磷酸神经鞘氨醇(S1P)对大鼠骨骼肌成肌细胞DNA合成的影响

目的观察外源性1-磷酸神经鞘氨醇(sphingosine1-phosphate,S1P)对大鼠骨骼肌成肌细胞增殖的影响。方法分离和培养大鼠骨骼肌成肌细胞,通过制备S1P脂质体使S1P转运到骨骼肌成肌细胞内或直接加入外源性S1P,采用3H-TdR渗入法检测S1P进入细胞内和在细胞外对骨骼肌成肌细胞DNA的合成;进一步使用磷酸神经鞘氨醇激酶(sphingosinekinase,SphK)活性抑制剂N,N二甲基鞘氨醇(N,Ndimethylsphingosine,DMS)和HACPT［2-(p-hydroxyanilino)-4-(p-chlorophenyl)thiazole］,观察其对S1P促进DNA合成作用的影响。结果S1P脂质体转入可明显促进骨骼肌成肌细胞DNA合成。100~1000nmol/L剂量范围内S1P脂质体使细胞胸腺嘧啶核苷(3HTdR)的摄入量较对照组增加12.3%~50.7%(P<0.01),并与剂量呈正相关。该促进作用不会被SphK活性抑制剂DMS和HACPT所阻断。S1P直接加入培养液同样能促进细胞DNA合成(P<0.01),500和1000nmol/L剂量组3H-TdR的摄入量较对照组分别增加18.8%(P<0.05)和26.5%(P<0.05),增幅低于同剂量的S1P脂质体。该促进作用可被DMS和HACPT所阻断。结论外源性S1P可促进体外培养的大鼠骨骼肌成肌细胞增殖,其作用可能与细胞内SphK活性增加引起细胞内S1P生成增多。