一株嗜热梭菌β-1，4-葡聚糖内切酶基因的克隆及表达

：【目的】筛选耐热性好的葡聚糖内切酶基因，以构建耐热且酶活高的基因工程菌。【方法】以嗜热梭菌（SymbiobacteriumthermophilumIAM14863）基因组DNA为模板克隆了编码葡聚糖内切酶的基因，同时将该酶基因构建于表达载体pET32a(+)中，获得重组表达载体pET32a-Glu，转化至E.coliBL21(DE3)PLYS中并进行表达。【结果】该基因大小为1101bp，共编码366个氨基酸；SDS-PAGE电泳表明该基因在E.coliBL21(DE3)PLYS中得到了有效表达，相对分子质量约为60kDa，纯化后重组酶活力为103U/mL；酶学性质实验表明该酶最适pH为5左右，最适反应温度为55℃，且此酶具有良好的耐热性(75℃左右)和pH稳定性。【结论】首次将S.thermophilum中的β-1，4-葡聚糖内切酶基因重组到表达载体pET32a(+)中，在大肠杆菌中得到高效表达，为该酶在食品、纺织、化工等领域的广泛应用奠定基础。