15N标记S-苄基-L-半胱氨酸含量及其同位素丰度检测

建立了一种测定发酵液中15N标记S-苄基-L-半胱氨酸(SBC)含量的高效液相色谱法(HPLC)，该方法采用CosmosilC18(5μm，150mm×4.6mm)色谱柱为分离柱，2,4-二硝基氟苯为衍生剂，0.05mol/L乙酸钠缓冲溶液(pH=6.5，含10mL/LN,N二甲基甲酰胺)与V(乙腈)∶V(水)=3∶1为流动相，梯度洗脱，流速1.0mL/min，检测波长为350nm，柱温为30℃；并采用微量高温燃烧-质谱法对15N标记SBC样品的同位素丰度进行了检测。结果显示，SBC浓度为0.2～1.0g/L时，与其峰面积呈良好的线性关系,y=3×106x-4.16×104，R2=0.9986，平均加标回收率97.30%，检测限为3.95×10-4g/L，测定结果的相对标准偏差为0.55%；15N标记SBC丰度检测时，最小称样量为2mg，最佳反应温度为530℃，反应时间为3h;15N丰度测定值的相对标准偏差为0.17%。