水飞蓟宾通过上调 ｐ１５ＩＮＫ４Ｂ和Ｐ２１ＷＡＦ１／ＣＩＰ１活化ＪＮＫ诱导人胰腺癌细胞Ｇ１期阻滞及细胞凋亡

摘要 目的：探讨水飞蓟宾对胰腺癌ＡｓＰＣ－１细胞的增殖抑制作用及其作用机制．方法：ＭＴＴ法和克隆形成抑制实验观察水飞蓟宾对人胰腺癌ＡｓＰＣ－１细胞的增殖抑制作用，碘化丙锭（ＰＩ）单染色检测细胞周期改变，ＡｎｎｅｘｉｎＶ－ＦＩＴＣ／ＰＩ双染流式细胞术检测细胞凋亡水平，Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔｔｉｎｇ检测细胞周期及细胞凋亡相关蛋白的表达．结果：不同浓度的水飞蓟宾对胰腺癌ＡｓＰＣ－１细胞的生长均有抑制作用，且呈剂量－效应和时间－效应关系（Ｐ＜００５），水飞蓟宾作用于ＡｓＰＣ－１细胞４８、７２ｈ的 IC50浓度分别为２２４.２０、８７.２５μｍｏｌ／Ｌ；克隆形成抑制实验显示，随着水飞蓟宾浓度增加，ＡｓＰＣ－１细胞克隆形成逐渐减少．细胞周期检测结果显示，随着水飞蓟宾浓度的增加，胰腺癌ＡｓＰＣ－１细胞出现明显Ｇ１期阻滞；水飞蓟宾处理组细胞的周期蛋白ＣｙｃｌｉｎＤ１、ＣｙｃｌｉｎＥ２、ＣｙｃｌｉｎＡ、ＣｙｃｌｉｎＢ１表达下降，细胞周期蛋白激酶ＣＤＫ４、ＣＤＫ６表达不变，细胞周期素依赖性蛋白激酶抑制蛋白 P15INK48、P21WAF1/CIP1表达升高，与流式检测的结果相一致．不同浓度水飞蓟宾作用４８ｈ后，出现明显的凋亡细胞群；同时发现Ｃａｓｐａｓｅ－９、Ｃａｓｐａｓｅ－３活化降解，Ｃａｓｐａｓｅ３下游效应蛋白ＰＡＲＰ出现切割条带．ＪＮＫ蛋白表达增加并磷酸化活化，Ｂｃｌ－２蛋白家族中抗凋亡蛋白Ｂｃｌ－２、Ｂｃｌ－ｘＬ、Ｍｃｌ－１表达明显降低，促凋亡蛋白Ｂａｘ表达基本不变，ＢＨ３－ｏｎｌｙ蛋白Ｂｃｌｘｓ、Ｂｉｄ、Ｂｉｍ表达增加．结论：水飞蓟宾明显抑制胰腺癌细胞增殖，通过诱导 P15INK48、P21WAF1/CIP1表达阻滞细胞周期在Ｇ１期，并通过诱导ＪＮＫ活化激活线粒体细胞凋亡途径，进而诱导胰腺癌ＡｓＰＣ－１细胞凋亡．