胎鼠脑组织生长锥的提取及鉴定

目的建立脑组织生长锥提取的方法。方法采用梯度蔗糖离心的方法提取生长锥，透射电镜和扫描电镜观察分离物的形态，免疫荧光和免疫印迹检测GAP-43的表达。结果梯度浓度蔗糖离心把脑组织悬液分离为3层，上层密度小，浓度位于上清至0.75mol/L蔗糖之间，中层密度较大，浓度位于0.75~1.0mol/L,蔗糖之间，下层密度最大，浓度位于1.00~2.66mol/L蔗糖之间；透射电镜见上层分离物为大量着色浅的空泡状结构，颗粒大小较均匀，中、下层分离物为大量着色深的致密颗粒及不规则形态的细胞碎片，颗粒大小不均匀；扫描电镜见分离物颗粒均为白色、大小不一、形状不规则的颗粒，上层较中、下层颗粒体积大；免疫荧光及免疫印迹证实分离物中均有大量GAP-43表达，上层分离物几乎无GFAP表达，中、下层有少量GFAP表达。结论梯度蔗糖离心的方法可以依据颗粒的大小分离脑组织，分离物最上层内的组分为生长锥。