氯化钴对人的ｅＮＯＳ基因启动子ＳＰ１改构体转录活性的影响

构建改造的人血管内皮细胞一氧化氮合酶（ｅＮＯＳ）基因启动子，利用氯化钴诱导的人脐静脉血管内皮细胞１２缺氧模型研究其基因启动子活性的变化．方法用不同剂量的氯化钴体外处理细胞复制缺氧模型，ＰＣＲ点突变技术构建突变启动子ｐＧＬ２-ｅＮＯＳ-ｉｎｓＳＰ１，分别将ｐＧＬ２-ｅＮＯＳ-ｉｎｓＳＰ１和ｐＧＬ２-ｅＮＯＳ-ｐ载体导入ＨＵＶＥＣ-１２细胞，双荧光素酶报告基因技术用于检测启动子转录活性的变化．结果ＤＮＡ测序显示人的ｅＮＯＳ基因启动子ＳＰ１改构体的序列正确；改构体ｅＮＯＳ启动子活性在一定范围内随氯化钴刺激剂量的增加而升高．结论ＳＰ１插入改造的方法显著提高了ｅＮＯＳ基因启动子的转录活性．