假单胞菌褐藻胶裂合酶活性片段的基因克隆及重组表达条件的优化
, PP. 242-246
Keywords: 假单胞菌,褐藻胶裂合酶,基序,基因克隆,表达
Abstract:
为分析假单胞菌（Pseudomonas）膜周质中褐藻胶裂合酶（alginatelyase，AlgL）的最小活性单元，进行了活性片段的初步研究.用简并引物克隆MY01菌株中AlgL基因的片段，用特异引物扩增目的序列并克隆入pBADgⅢ/A载体，转化大肠杆菌并筛选阳性克隆.进行Lˉ阿拉伯糖诱导表达条件的优化，超声破碎重组菌体并分离水溶性组分作为粗酶，以褐藻酸钠为底物进行酶解反应，在235nm测定产物的吸收值.结果该基因片段300bp大小，GenBank收录号为AY736133，所编码的氨基酸序列中含有基序
| [1] | LinkerA，Jones R S.J Biol Chem，1966，241:384ˉ3851.
|
| [2] | Gorin P A，Spencer J F T.Can J Chem，1966，44:993ˉ998.
|
| [3] | Svanem B IG，W enche I S，et al.J Biol Chem，2001，276（34）:31542ˉ31550.
|
| [4] | SchillerN L，Monday S R，Boyd C，et al.J Bacteriol，1993，175（15）:4780ˉ4789.
|
| [5] | Byod A，Chakrabarty A M.ApplEnvironMicrob，1994，60（7）:2355ˉ2359.
|
| [6] | Sumita J，Dennis E O.Infect Immnun，2005，73（10）:6429ˉ6436.
|
| [7] | w BakkevigK，Sletta H，GimmestadM，et al.J Bacteriol，2005，187（24）:8375ˉ8384.
|
| [8] | AlkawashM A，Soothill J S，SchillerN L.Apims，2006，114（2）:131ˉ138.
|
| [9] | 韩文君.褐藻多糖生物转化的分子生物学基础研究[D].中国海洋大学药物所，2003.
|
| [10] | 杨甲定，钟海文.白兰瓜中ACC氧化酶基因克隆与序列分析[J].兰州大学学报:自然科学版，2005，41（1）:122ˉ124.
|
| [11] | 吴夏，陈渝，彭正松，等.四川黑熊线粒体12S和16S rRNA基因的克隆和序列分析[J].四川师范大学学报:自然科学版，2007，30（3）:402ˉ405.
|
| [12] | 苟帮超，叶盛，李维，等.产气肠杆菌αˉ乙酰乳酸酶基因的克隆和表达[J].四川师范大学学报:自然科学版，2006，29（6）:739ˉ742.
|
| [13] | Yoon H J，Mikami B，HashimotoW，et al.JMol Biol，1999，290:505ˉ514.
|
| [14] | Boyd J，Turvey J R.CarbohydrRes，1977，57:163ˉ171.
|
| [15] | Wong T Y，Preston L A，SchillerN L.AnnualRevMicrobiol，2000，54:289ˉ340.
|
| [16] | HashimotoW，OsamuM，KeikoM，et al.J Bacteriol，2000，182（16）:4572ˉ4577.
|
| [17] | EckhartL，FischerH，Barken K B，et al.Br J Dermato，2007，156（6）:1342ˉ1345.
|
Full-Text
