结核分枝杆菌宁夏分离株pstS1基因在毕赤酵母中的表达

目的亚克隆结核分枝杆菌宁夏分离株pstS1基因,构建pPICZα-A-S1表达载体,并在毕赤酵母表达系统中分泌表达,为pstS1基因所表达的蛋白功能的研究奠定基础。方法PCR方法亚克隆结核分枝杆菌宁夏分离株pstS1基因片段,构建毕赤酵母表达载体pPICZα-A-S1,重组质粒线性化之后电转化到在毕赤酵母表达菌株SMD1168感受态细胞中,挑选阳性克隆菌株并用甲醇进行诱导表达,表达产物通过SDS-PAGE进行鉴定。结果构建了结核分枝杆菌pPICZα-A-pstS1重组质粒,以甲醇进行诱导,经过SDS-PAGE电泳进行分析,结果显示pstS1基因表达出了大约为38kD的蛋白,经过Westernblot分析,分泌的蛋白与结核分支杆菌38KD抗血清能够特异性的识别。结论结核分枝杆菌pstS1基因可以在毕赤酵母中进行很好的分泌表达,为以后pstS1基因的表达产物在疫苗研制、诊断血清研究等方面的应用奠定了基础。