口蹄疫病毒VP1基因重组腺病毒的构建与鉴定

目的构建表达O型口蹄疫病毒(Foot-and-MouthdiseaseVirus,FMDV)VP1基因的重组腺病毒并对其进行鉴定。方法将FMDVVP1基因克隆到腺病毒的穿梭载体pAdenoVator-CMV5-IRES-GFP中。得到的阳性穿梭质粒经PmeⅠ酶线性化后,利用电转化技术将线性化的阳性质粒与腺病毒骨架载体pAdenoVatorΔE1/E3共转化大肠杆菌BJ5183感受态细胞,使其在大肠杆菌中进行同源重组。将筛选到的重组病毒质粒经PacⅠ酶线性化后暴露出包装信号,通过脂质体LipofectamineTM2000转染HEK-293A细胞后得到重组病毒。利用报告基因GFP和细胞病变检测重组病毒滴度和感染效率,通过PCR和western-blot检测FMDVVP1基因在重组腺病毒中的表达。结果成功构建了表达FMDVVP1基因的重组腺病毒rAd5-VP1,其滴度为1011.87个TCID50/mL。western-blot检测重组腺病毒rAd5-VP1能与FMDV阳性血清发生反应。结论重组腺病毒rAd5-VP1能与FMDV阳性血清发生反应,PCR和western-blot检测FMDVVP1基因在重组腺病毒中稳定表达。