大鼠HSG基因重组腺病毒载体的构建及鉴定

目的构建大鼠增殖抑制基因(rathyperplasiasuppressorgene,rHSG)的腺病毒载体,观察其在转染大鼠C6胶质瘤细胞后的表达。方法由前期构建的pGM-T-rHSG质粒中酶切rHSG基因片段,亚克隆入pShut-tle-CMV-EGFP重组穿梭载体中,而后与腺病毒骨架质粒pAdxsi酶切连接,经过抗性筛选及酶切鉴定得到阳性的pAdxsi-GFP-rHSG重组质粒;pAdxsi-GFP-rHSG质粒经PacI线性化后转染293细胞,包装重组腺病毒,进行PCR鉴定和PCR产物测序鉴定,Western-blot法检测C6胶质瘤细胞转染rHSG后的表达效果。结果酶切鉴定证实rHSG基因正确插入穿梭载体pShuttle-CMV-EGFP,收获病毒后的PCR及测序鉴定pAdxsi-GFP-rHSG重组成功,并能在C6胶质瘤细胞内高效表达。结论成功构建出了介导大鼠增殖抑制基因的腺病毒载体pAdxsi-GFP-rHSG,能在C6胶质瘤细胞内高效表达。