胎鼠脊髓神经干细胞分离培养及诱导分化

目的探讨机械分离法与酶消化法在脊髓源性神经干细胞(NSCs)体外培养的优劣,并观察脊髓源性NSCs体外培养时增殖和分化的特点。方法取妊娠第15天(E15d)的胎鼠神经管组织,分别采用酶消化法和机械吹打分离法离散细胞,进行无血清培养,并以上述两种方法传代培养。借助免疫细胞化学法对NSCs及分化结果进行鉴定,细胞球计数法检测成球率,测量神经球直径分析细胞增殖能力,MTT法监测细胞生长情况。结果①培养的细胞具有增殖成球生长的特性并且抗巢蛋白免疫荧光阳性、血清可诱导分化出胶质细胞酸性蛋白(GFAP)、神经元特异性希醇化酶(NSE)阳性表达的细胞。②细胞直径酶消化组(137.74±11.62)μm,机械分离组(143.69±12.20)μm(P>0.05)。③生长曲线结果显示酶消化组NSCs综合生长增殖能力较高,OD值酶消化组(0.39±0.15),机械分离组为(0.36±0.13)。结论胎鼠脊髓组织中存在具有自我增殖和多分化潜能的NSCs,原代无血清成球培养时采用酶消化法更有利于获得较多NSCs。