纳米银体外抗H3N2流感病毒作用及其机制初步探讨

【】　目的　研究纳米银体外抗H3N2流感病毒的作用，并初步探索其作用机制。　方法　在H3N2流感病毒吸附细胞后加入纳米银和吸附前用纳米银预处理犬肾细胞（MDCK），在体外用细胞病变效应（cytopathiceffect，CPE）观察法和3-（4，5-二甲基-2-噻唑）-2，5-二苯基溴化四唑（3-（4，5-dimethylthiazol-2-yl）-2，5-diphenyltetrazoliumbromide，MTT）测值法，分析纳米银对H3N2流感病毒感染MDCK细胞的预防作用、直接灭活作用以及对流感病毒子代病毒体生成的抑制作用，运用RT-PCR法研究纳米银对H3N2流感病毒HA基因复制的干扰作用。　结果　纳米银能明显杀伤H3N2流感病毒，50、25μg/mL的纳米银溶液与H3N2流感病毒充分作用2h后感染MDCK细胞，细胞存活率分别为94.38%和92.17%，纳米银能有效抑制流感病毒对MDCK细胞的侵入和侵入后病毒的继续增殖，25μg/mL纳米银溶液通过上述两种方式处理细胞，细胞存活率分别为85.39%和83.28%，与病毒对照组相比，差异均有统计学意义（P<0.001）；400、200μg/mL纳米银溶液分别与流感病毒H3N2充分混合作用15、30、60、120min后，病毒液的HA基因均未能成功扩增，纯病毒液和溶剂对照组在1700bp处均出现明显条带。　结论　通过3种不同的给药方式，纳米银在体外均能明显抑制流感病毒对细胞的感染，纳米银抑制流感病毒的机制可能是通过干扰H3N2流感病毒和吸附、穿入和基因的复制，从而抑制子代病毒体的生成。？【Abstract】　Objective　Toexploretheanti-viraleffectsofsilver-nanoparticles(silver-nps)onH3N2influenzavirusinvitroandtoevaluateitsmechanism.　Methods　Silver-npswasaddedtocaninekidneycells(MDCK)beforeandafterthecellswasadsorptedbyH3N2influenzavirus.Cytopathiceffect(CPE)assayandthe3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazoliumbromide(MTT)assaywereusedtoanalyzethepreventiveeffect,directlyoffdeactivation,andtheinhibitformationofprogenyvirionsofsilver-npsonH3N2viruses.TheinterferenceofHAgenereplicationwasobservedbytheRT-PCRassay.　Results　ThesurvivalrateofMDCKcellswas94.38%and92.17%after50and25μg/mLsilver-npsweremixedwith100TCID？50H3N2virusin2hours,andthesurvivalrateofMDCKcellswas85.39%and83.28%beforeandafterthecellswasadsorptedbyH3N2influenzaviruswhen25μg/mLsilver-npswasaddedtothecells(allcomparedtoviruscontrol,P<0.001),whichshowedthatsilver-npscouldinactivateH3N2virus,preventetheminvasingtothecellsandreproductingwhenH3N2enteredthecellremarkedly.TheHAgenewasnotamplifiedsuccessfullywhen50and25μg/mLsilver-npsweremixedwith100TCID50H3N2virusin15,30,60,and120minuteslater,butbothpurevirussolutionandsolventcontrolgroupappearedasignificantbrightbandinthe1700bparea.　Conclusion　Underthreedifferentadministrationmodes,silver-npshasanobviouseffectagainstH3N2invitro,whichcouldinterferetheHAgenereplicationandinhibittheformationofH3N2progenyvirions.