TaqMan探针实时荧光PCR快速检测奶粉中沙门氏菌的研究

目的建立快速、灵敏地检测奶粉中沙门氏菌的TaqMan探针实时荧光PCR方法。方法根据沙门氏菌的invA基因序列设计引物与TaqMan探针，建立并评价实时荧光PCR反应体系的特异性，制备鼠伤寒沙门菌标准株（CMCC50115）10倍梯度稀释的菌液，检测对纯菌液的灵敏度，制备染菌量分别为1.4×（100~105）CFU/25g奶粉的样本进行人工染菌量试验，在增菌0、4、8、12、16、20、24、36和48h时各取1mL培养液，提取DNA进行TaqMan实时荧光PCR检测，同步进行传统细菌分离，比较2种方法对人工染菌标本的最低检测限。结果建立的沙门氏菌TaqMan探针实时荧光PCR仅需40min即可完成检测，与志贺氏菌、大肠埃希氏菌等非目标细菌无交叉反应，对纯菌检测下限为1.4CFU/mL，对染菌量为1.4×100CFU/25g奶粉的检测下限仅需增菌16h即可检测出来，而要达到这个检测限，传统方法则需要36h。结论沙门氏菌TaqMan探针实时荧光PCR快速、特异、灵敏，可用于婴幼儿奶粉中沙门氏菌的快速筛查，提高食品安全风险监测的速度和灵敏度。