葡萄糖苷酶在毕赤酵母中的重组表达及一步纯化

从绿色木霉中克隆了葡萄糖苷酶bg基因，构建入表达载体pPIC9k-His6中，然后在AOX1启动子的控制下，在毕赤酵母GS115菌株中表达.在5L发酵罐中发酵120h，重组P.pastorisMut+菌株湿重达360.6g/L，葡萄糖苷酶浓度和酶活分别为2.1mg/mL和73.5U/mL.经亲和层析一步纯化后，得到了电泳纯的葡萄糖苷酶.HPLC分析显示其纯度为95.6%，比酶活为71.9U/mg.纯化过程酶得率为73.6%，纯化倍数为42.6.纯酶的等电点为5.0，最适温度为50℃，最适pH为6.5.金属离子Ag+,Ca2+,Cu2+,Fe2+及SDS对葡萄糖苷酶活性有抑制作用，而Mg2+,Mn2+,K+能增强葡萄糖苷酶活性，其中1mol/LMg2+能使酶活提高20%.