CTAB法制备超螺旋质粒DNA

研究了基因治疗用载体质粒DNA的一种非色谱的大规模纯化方法-CTAB沉淀法，并对其进行了工艺优化.首先采用高纯过滤介质CelPure去除大量杂质，并利用CTAB浓度梯度溶液研究了不同形式DNA(超螺旋质粒DNA、切口质粒DNA、线性质粒DNA、染色体DNA)沉淀能力的差异，选择性地从蛋白质、RNA及其他形式DNA中提取超螺旋质粒DNA.针对含有pcDNA3的DH5a菌株，确定CTAB完全沉淀超螺旋质粒DNA的浓度为2.0g/L，由NaCl对不同沉淀的溶解能力，确定溶解沉淀的最优盐浓度为0.75mol/L.用此方法得到的超螺旋质粒DNA的纯度达90%以上，收率为78.94%.RNA、蛋白质残量以及内毒素均符合药品质量标准要求.CTAB对质粒DNA的沉淀效果与质粒DNA的初始浓度有关，并且超螺旋质粒DNA浓度的降低与CTAB的添加量呈一定的线性关系.超螺旋质粒的分子量越小越不易被分离，并且结构特性比分子量在分离过程中更据主导作用.