pUCD-recA重组发光菌构建及对遗传毒性污染物响应作用

基因重组发光菌在水质毒性的评价中具有重要的作用，本研究从分析污染物毒性损伤的机制出发，构建新型pUCD-recA基因重组发光菌.用PCR法从大肠杆菌W3110中扩增recA基因，将其与pGEM-Teasy载体连接后测序.测序正确的recA片段及pUCD615载体均用BamHⅠ、EcoRⅠ双酶切，连接后电转化导入宿主菌JM109.挑取克隆，提取质粒用PCR鉴定，阳性克隆再进行测序.将构建成功的pUCD-recA载体转化入大肠杆菌RFM443，加入相应的遗传毒性污染物，观察发光响应作用.结果表明，recA基因PCR扩增出的片段为293　bp，测序结果与GenBank中的recA序列进行BLAST比对，同源性为99％，表明扩增序列正确.与pUCD615载体连接后的测序结果表明，recA基因已正确地插入到pUCD615的多克隆位点，方向和读码框正确，重组发光菌载体构建成功.将构建好的重组载体转化入RFM443宿主菌，加入遗传毒性污染物观察响应效果.丝裂霉素C（MMC）对pUCDrecA重组发光菌诱导效果最好，0.01mg/L即可有很好的响应曲线；N′-甲基N′-硝基亚硝基胍（MNNG）则在50～100mg/L时可发挥最佳响应作用.