白腐真菌细胞色素P450的诱导及检测方法研究

以CO结合差光谱为基本检测法，研究了白腐真菌黄孢原毛平革菌中细胞色素P450的诱导和适宜的分离检测方法.结果表明，正己烷对该真菌P450有显著的诱导作用，P450诱导量受正己烷浓度和诱导时间的影响，每小时投加正己烷2μL/mL、诱导6　h可使该真菌微粒体P450比浓度高达140～160　pmol/mg.在此基础上，本研究优化了分离P450时破碎细胞的方法以及光谱法检测P450的条件.破碎细胞时，采用高速分散结合玻璃研磨，比采用玻璃研磨、超声破碎和珠磨等方法分离的微粒体P450含量高1～5倍，是更为适宜的破碎方法.检测CO结合差光谱时，通气和还原条件对P450检测值有显著影响，较适宜的条件为：样品池和对照池分别通入等量的CO和N2，通气流量为3　mL/min（300　μL样本），通气时间40s；通气后投加还原剂低亚硫酸钠，投加浓度为0.4mol/L.