基于RT-qPCR选择性检测水中活性病原菌

以大肠杆菌和粪肠球菌作为研究对象,研究建立了一种逆转录定量PCR(reversetranscriptionqquantitativePCR,RT-qPCR)方法,以选择性检测水中活性病原菌.研究结果表明,细菌体内的RNA经过RT-PCR逆转录成cDNA后利用qPCR可定量目的基因拷贝数,对处于稳定生长期的大肠杆菌(培养6~18h)和粪肠球菌(培养10~38h)体内的RNA含量进行检测分别为1copies·CFU-1和7.98×102copies·CFU-1,以此作为细菌定量的依据,达到准确定量检测水体中目的基因RNA拷贝数而确定活性细菌含量的目的.通过3种方法(培养法、qPCR、RT-qPCR)检测热灭活后的大肠杆菌和粪肠球菌,结果表明与qPCR相比,RT-qPCR能够区分1.43lgcopy(大肠杆菌)与2.5lgcopy(粪肠球菌)的非活性菌,进而选择性检测活性病原菌.实际水样底物基质对RT-qPCR方法的影响不大,RT-qPCR与培养法之间有较好的线性相关性(大肠杆菌,R2=0.930,粪肠球菌,R2=0.948),本研究建立的方法可以用于实际水样活性病原菌的检测.