镍钴转运酶NiCoT基因的克隆表达及基因工程菌对镍离子的富集

利用PCR技术从Staphylococcusaureus/ATCC6538基因组中扩增出大小为1?053bp的镍钴转运酶基因NiCoTgene，将其连接到pET-3c载体上构建重组质粒，并转化至E.coliBL21.筛选阳性菌并经酶切分析和PCR扩增双重鉴定.核苷酸序列测定及分析结果与GenBank中报道的同类基因相似性高达97%以上，表明其具有正确的NiCoT基因核苷酸序列.重组菌的SDS-PAGE结果图谱中，在相对分子量为39?000附近有特异性蛋白条带，大小符合预测值，表明NiCoT基因在E.coliBL21中成功表达.基因工程菌在IPTG用量为1.00mmol·L-1，诱导时间为4h的条件下培养对镍离子的富集能力最高.在不同镍离子浓度时，基因工程菌对溶液中Ni2+的平衡富集量为11.33mg·g-1，与原始宿主菌相比提高了3倍.对基因工程菌吸附镍和钴的实验表明，StaphylococcusaureusATCC6538的NiCoT对镍具有较高的特异性和富集容量，属于第Ⅲ类镍钴转运酶.