3-PBA降解菌BA3的降解特性及基因工程菌构建

从石油污染土壤中分离到1株能以3-苯氧基苯甲酸（3-PBA）为唯一碳源生长的细菌，命名为BA3.根据其生理生化特征和16SrDNA序列相似性分析，将该菌鉴定为鞘脂菌属(Sphingobiumsp.).该菌株在60h内对100mg·L-1的3-苯氧基苯甲酸的降解率达到99%.降解3-苯氧基苯甲酸的最适温度为30℃，pH值为7.0，降解速率与初始接种量呈正相关.拟除虫菊酯类杀虫剂水解酶基因pytH为本实验室克隆到的一个新的菊酯水解酶基因，通过PCR从菊酯降解菌株JZ-2总DNA扩增了pytH，将pytH定向克隆到pBBRMCS-5载体上，构建重组质粒pPYTH，在辅助质粒pRK600的帮助下，通过三亲接合将pPYTH转移到3-PBA降解菌株Sphingobiumsp.BA3中，获得工程菌Sphingobiumsp.BA3-pytH；甲氰菊酯的降解实验表明，菌株JZ-2在48h内对50mg·L-1的甲氰菊酯降解率仅为60%左右，工程菌BA3-pytH相同条件下对50mg·L-1的甲氰菊酯降解率达到95%以上，同时对甲氰菊酯的降解中间产物3-PBA也能较快降解，不会对菊酯的降解产生反馈抑制.工程菌BA3-pytH因其对甲氰菊酯和其降解中间产物3-PBA的快速降解能力，比原始菌株JZ-2在菊酯污染土壤生物修复应用中更具有优势.