腾冲菌脂肪酶的表达纯化及酶学性质的表征

将来自腾冲菌的脂肪酶（LipA）基因（lipA）克隆到大肠杆菌表达载体pET28a（含T7启动子）和pTrc99A（含Trc启动子）中，转入大肠杆菌表达，发现Trc启动子更适合LipA的表达。通过热处理和DEAE-Sepharose阴离子柱纯化过程，重组LipA得到纯化，比酶活达到1.9U/mg，重组LipA分子量为42kDa。重组LipA在80℃、pH4.5时酶活最高，经85℃保温2h，酶活保持60%以上；在pH值4.0～6.0之间，LipA具有较好的稳定性；Cu2+和Zn2+对酶活力分别有38.9%和69.2%的抑制作用，Mn2+、Co2+和Tween-20对该酶有较大的激活作用；以p-nitrophenyl-laurate(p-NP-C12)为底物时，该酶的Km值为1.5mmol/L，kcat为34.5s?1。