1,3-丙二醇脱氢酶一步纯化与杂化凝胶固定化的初步研究

转录表达来源于Klebsiella.p1,3-丙二醇脱氢酶（PDH）基因片段的E.coli工程菌，在5L发酵罐、30℃、pH值7.0、200r/min（微氧）条件下培养20h；发酵菌体经破碎分离后所得样品通过HisTrapHP柱亲和层析一步纯化得到电泳纯的PDH，纯化倍数为2.94倍，活性回收率为50%，经SDS-PAGE电泳鉴定获得一条清晰条带，表达蛋白亚基相对分子质量约为41kDa。用改进的溶胶-凝胶法（杂化凝胶）包埋纯化酶，考察正硅酸乙酯（TEOS）浓度、海藻酸盐（ALG）浓度、CaCl2浓度及ALG与TEOS体积比等因素对酶固定化效果的影响，结果表明，较优包埋条件为ρ(TEOS)=20g/L，ρ(ALG)=30g/L，ρ(CaCl2)=40g/L，V(ALG)∶V(TEOS)=3∶1；由此制备的PDH的ALG-SiO2杂化凝胶保藏60天后酶活仍保持80%，进行批次反应时，反应3批后酶活保持70.3%，反应第6批时酶活剩余29.8%。