源于博伊丁假丝酵母的甲酸脱氢酶的分离纯化与反应机制

使用两步发酵法培养博伊丁假丝酵母(Candidaboidinii)，菌株细胞经破碎与分离所得粗酶液经DEAESepHarosesFastFlow层析快速纯化获得NAD+依赖型的甲酸脱氢酶，酶的比活从0.83U/mg提高到2.67U/mg，纯化倍数和回收率分别为3.22倍和29.7%。研究了从反应物消耗到产物生成之间的酶反应历程，确定了甲酸脱氢酶的酶促反应为有序BiBi反应机制，其中NAD+是第一底物，HCOONa是第二底物，NADH是首先释放的第一产物，HCO3ˉ是随后释放的第二产物；二次作图法求解出Vmax、KiS1、KmS2、KmS1等动力学参数，确定甲酸脱氢酶有序BiBi反应速度方程为。