微量热法研究单底物酶促反应的热力学和动力学性质及过渡态的分析

用LKB-2107型微量热系统,测定了漆酶催化氧化3,4-二羟基苯甲醛、邻甲氧基酚、邻苯三酚、3,4,5-三羟基苯甲酸反应的热谱图,利用热谱图计算了米氏常数(Km)、反应速率常数(k2)和热力学参数(ΔrHm,ΔG0,ΔT^≠,Ea,ΔST^≠)。并应用过渡态理论对其催化过程进行了分析。结果表明稳定过渡态结构有利于酶促反应,酶-底物在反应物时相互作用仅仅是降低酶的催化效率。提出两种可能提高酶催化效率的方法。由活化熵(ΔST)<0得出酶-底物在过渡态的结构较酶-底物复合物的结构更为有序。