金属硫蛋白家族内的结构域拼接

金属硫蛋白(Metallothioneins,MTs)由结构独立且功能明显区别的β，α两个结构域组成。神经生长抑制因子(NeuronalGrowthInhibitoryFactor,GIF)双名金属硫蛋白-Ⅲ(MT-Ⅲ)，是神经系统中第一个被鉴定的具有神经元生长抑制功能的蛋白，而β－结构域为其功能结构域。为深入系统地研究MTs，尤其是GIF及其结构域的结构与功能，我们构建了金属硫蛋白家族内结构域拼接体βGIF-αMT-1(βⅢ-αⅠ)和βMT-1-αGIF(βⅠ-αⅢ)PCR扩增得各个结构域的cDNA序列，酶切后克隆入原核表达载体pGEX-4T-1，经发酵、诱导表达、亲和层析、凝血酶切和进一步纯化，得率约为80mg蛋白/L菌液。测其电泳行为、氨基酸组成、质谱、金属巯基含量等，证明得到了目的蛋白。紫外吸收图谱和圆二色性图谱显示，结构域拼接体拥有金属硫蛋白家族成员的特征金属巯基簇结构域，初步功能实验表明，βⅢ－αⅠ也具有抑制神经元生长的功能。