用硫酸软骨素A作探针共振瑞利散射及共振非线性散射法测定蛋白质

在pH1.8～2.5的Britton-Robinson(BR)缓冲介质中,硫酸软骨素A(CSA)的硫酸酯基离解而以带多个负电荷的大阴离子存在,而人血清白蛋白(HSA)、牛血清白蛋白(BSA)、糜蛋白酶(Chy)、溶菌酶(Lyso)和α-淀粉酶(α-Amy)等蛋白质处于其等电点(pI)之下,则是带多个正电荷的大阳离子,两者可借静电引力、氢键作用、疏水作用而结合形成复合物.此时将引起共振瑞利散射(RRS)和二级散射(SOS)、倍频散射(FDS)等共振非线性散射(RNLS)的显著增强并出现新的散射光谱.3种散射的散射增强(ΔIRRS,ΔISOS和ΔIFDS)均在一定范围内与蛋白质的浓度成正比,方法具有高灵敏度.三种方法对蛋白质的检出限分别为4.5～12.0(g/L(RRS法)、8.9～15.8(g/L(SOS法)和13.4～31.5(g/L(FDS法),其中以CSA-BSA体系灵敏度最高(检出限可达4.5(g/L).研究了反应体系的RRS,SOS和FDS的光谱特征、适宜的反应条件和影响因素,讨论了反应机理、结合模式以及散射增强的原因.并以CSA-BSA体系为例考察了共存物质的影响,表明方法有良好的选择性.方法可用于正常人血清及尿样中蛋白质的测定.