全部 标题 作者
关键词 摘要

OALib Journal期刊
ISSN: 2333-9721
费用:99美元

查看量下载量

相关文章

更多...
化学学报  2014 

利用表面活性剂介导的方法制备AgrC蛋白脂质体

DOI: 10.6023/A13111123, PP. 233-240

Keywords: 金黄色葡萄球菌,AgrC,表面活性剂,蛋白脂质体,膜蛋白

Full-Text   Cite this paper   Add to My Lib

Abstract:

膜蛋白AgrC是金黄色葡萄球菌双组分信号转导系统的感受激酶.其信号转导机制的阐明对于解决细菌耐药问题具有重要意义.目前膜蛋白研究的主要瓶颈是难以获得大量高纯度和功能稳定的蛋白.将目标蛋白表达在大肠杆菌体内,利用表面活性剂将其从细胞膜上溶解,纯化,这一系列步骤容易引起膜蛋白不稳定和功能损失.本文报道了用表面活性剂介导的方法将膜蛋白AgrC镶嵌到脂质体上,即形成蛋白脂质体.脂质体和蛋白脂质体的结构、形貌以及平均粒径分别用透射电镜和动态光散射仪表征.蔗糖密度梯度离心的结果表明蛋白重构效率达80%.硫醇试剂标记实验确定AgrC的细胞质域在脂质体中取向于内侧.体外磷酸化实验表明AgrC蛋白在脂质体中的自我磷酸化活性远远高于表面活性剂中的活性,且其自我磷酸化活性在2周内几乎没有损失.蛋白脂质体的构建不仅解决了膜蛋白的不稳定性问题,也为体外研究AgrC蛋白的结构、功能和信号转导机制提供了新的思路.

References

[1]  Gordon, C. P.; Williams, P.; Chan, W. C. J. Med. Chem. 2013, 56, 1389.
[2]  Gotoh, Y.; Eguchi, Y.; Watanabe, T.; Okamoto, S.; Doi, A.; Utsumi, R. Curr. Opin. Microbiol. 2010, 13, 232.
[3]  Sanowar, S.; LeMoual, H. Biochem. J. 2005, 390, 769.
[4]  Martin, M.; Albanesi, D.; Alzari, P. M.; de Mendoza, D. Protein Expr. Purif. 2009, 66, 39.
[5]  Janausch, I. G.; Garcia-Moreno, I.; Unden, G. J. Biol. Chem. 2002, 277, 39809.
[6]  Liu, C. G.; Quan, C. S.; Wang, J. F.; Yu, G. M.; Fan, S. D. China Biotechnology 2012, 32, 1. (刘春光, 权春善, 王剑锋, 于桂梅, 范圣第, 中国生物工程杂志, 2012, 32, 1.)
[7]  Wang, L. N.; Quan, C. S.; Liu, B. Q.; Wang, J. F.; Xiong, W.; Zhao, P. C.; Fan, S. D. PLoS ONE. 2013, 8, e80400. doi: 10. 1371/journal. pone. 0080400.
[8]  Lina, G.; Jarraud, S.; Ji, G.; Greenland, T.; Pedraza, A.; Etienne, J.; Novick, R. P.; Vandenesch, F. Mol. Microbiol. 1998, 28, 655.
[9]  Hofmann, K.; Stoffel, W. Biol. Chem. Hoppe-Seyler 1993, 347, 166.
[10]  Krogh, A.; Larsson, B.; von Heijne, G.; Sonnhammer, E. L. J. Mol. Biol. 2001, 305, 567.
[11]  Li, W.; Wang, J. H.; Quan, C. S.; Zheng, W.; Fan, S. D. Acta Biophysica Sinica 2009, 25, 219. (李巍, 王军华, 权春善, 郑维, 范圣第, 生物物理学报, 2009, 25, 219.)
[12]  Claros, M. G.; von Heijne, G. Comput. Appl. Biosci. 1994, 10, 685.
[13]  Bernsel, A.; Viklund, H.; Hennerdal, A.; Elofsson, A. Nucleic Acids Res. 2009, 37, W465.
[14]  Hirokawa, T.; Boon-Chieng, S.; Mitaku, S. Bioinformatics 1998, 14, 378.
[15]  Jones, D. T.; Taylor, W. R.; Thornton, J. M. Biochemistry 1994, 33, 3038.
[16]  McGuffin, L. J.; Bryson, K.; Jones, D. T. Bioinformatics 2000, 16, 404.
[17]  Wang, L. N.; Quan, C. S.; Xiong, W.; Qu, X. J.; Fan, S. D. BBA-Biomembranes 2013, (Available online 17 December 2013. DOI information: 10. 1016/j. bbamem. 2013. 12. 006).
[18]  Van Den Ent, F.; L?we, J. J. Biochem. Biophys. Methods 2006, 67, 67.
[19]  Wang, L. N.; Quan, C. S.; Liu, B. Q.; Xu, Y. B.; Zhao, P. C.; Xiong, W.; Fan, S. D. Int. J. Mol. Sci. 2013, 14, 18470.
[20]  Rigaud, J. L.; Lévy, D. Methods Enzymol. 2003, 372, 65.
[21]  Bartlett, G. R. J. Biol. Chem. 1959, 234, 466.
[22]  Quan, C. S.; Ma, J. L.; Wang, X.; Li, W.; Fan, S. D. Acta Chim. Sinica 2010, 68, 1167. (权春善, 马金龙, 王雪, 李巍, 范圣第, 化学学报, 2010, 68, 1167.)
[23]  Sanowar, S.; LeMoual, H. Biochem. J. 2005, 390, 769.
[24]  Lowy, F. D. N. Engl. J. Med. 1998, 339, 520.
[25]  Emori, T. G.; Gaynes, R. P. Clin. Microbiol. Rev. 1993, 6, 428.
[26]  Klevens, R. M.; Morrison, M. A.; Nadle, J.; Petit, S.; Gershman, K.; Ray, S.; Harrison, L. H.; Lynfield, R.; Dumyati, G.; Townes, J. M.; Craig, A. S.; Zell, E. R.; Fosheim, G. E.; McDougal, L. K.; Carey, R. B.; Fridkin, S. K. JAMA. 2007, 298, 1763.
[27]  De Lencastre, H.; Oliveira, D.; Tomasz, A. Curr. Opin. Microbiol. 2007, 10, 428.
[28]  Novick, R. P. Mol. Microbiol. 2003, 48, 1429.
[29]  Stauff, D. L.; Skaar, E. P. Contrib. Microbiol. 2009, 16, 120.
[30]  Cheung, A. L.; Nishina, K. A.; Trotonda, M. P.; Tamber, S. Int. J. Biochem. Cell. Biol. 2008, 40, 355.
[31]  Novick, R. P.; Ross, H. F.; Projan, S. J.; Kornblum, J.; Kreiswirth, B.; Moghazeh, S. EMBO J. 1993, 12, 3967.
[32]  Thoendel, M.; Kavanaugh, J. S.; Flack, C. E.; Horswill, A. R. Chem. Rev. 2011, 111, 117.
[33]  Geisinger, E.; George, E. A.; Muir, T. W.; Novick, R. P. J. Biol. Chem. 2008, 283, 8930.
[34]  Geisinger, E.; Muir, T. W.; Novick, R. P. Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. 2009, 106, 1216.
[35]  Grebe, T. W.; Stock, J. B. Adv. Microb. Physiol. 1999, 41, 139.
[36]  George Cisar, E. A.; Geisinger, E.; Muir, T. W.; Novick, R. P. Mol. Microbiol. 2009, 74, 44.
[37]  Taubes, G. Science. 2008, 321, 356.
[38]  Chambers, H. F.; Deleo F. R. Nat. Rev. Microbiol. 2009, 7, 629.

Full-Text

Contact Us

service@oalib.com

QQ:3279437679

WhatsApp +8615387084133