基于正交设计的畜禽废水处理中活性污泥DNA的16S rDNA－PCR扩增体系

用SBR反应器处理畜禽废水，提取其中好氧活性污泥总DNA，比较3种物理破壁方法对DNA质量的影响，同时选择4个因素（DNA模板，Mg2+，dNTP，引物）对16SrDNA-PCR反应体系进行正交优化,并确定最适退火温度。结果表明，反复冻融法的DNA纯度大于玻珠振荡法和摇床振荡法，可不经纯化直接扩增；DNA浓度对PCR结果影响最大，Mg2+和dNTP浓度的影响次之且程度相同，引物浓度影响最小；最佳PCR扩增体系（25μL）的组成为：模板DNA0.32μg,dNTP200μmol·L-1,Mg2+1.5mmol·L-1,引物1.0μmol·L-1,TaqDNA聚合酶0.2U，且最适退火温度为56.5℃。