金钱鱼脑型芳香化酶基因cDNA 的克隆及表达分析

为了探讨Cyp19a1b基因表达与温度及鱼油添加量的相互关系,奠定金钱鱼人工繁育理论基础,作者采用RT-PCR和RACE法,克隆了金钱鱼(ScatophagusargueLinnaeus)脑型芳香化酶基因(Cyp19a1b);采用实时荧光定量PCR法,检测了不同温度(23、26和29℃)和不同水平鱼油(0、2%和6%)处理后二龄雌性金钱鱼脑垂体中Cyp19a1bmRNA表达。结果表明:Cyp19a1bcDNA全长2409bp,5′端非编码区164bp,3′端(不包括poly(A))712bp,开放阅读框(ORF)1506bp,编码501个氨基酸,推测其蛋白质分子量为56.697kDa。序列分析及分子系统进化树结果表明:金钱鱼Cyp19a1b氨基酸序列与黄锡鲷和舌齿鲈Cyp19a1b同源性较高,分别为86.2%、86.5%,与鲤鱼(Cyprinuscarpio)、稀有■鲫(Gobiocyprisrarus)、斑马鱼(Daniorerio)、赤点石斑鱼(Epinephelusakaara)、大黄鱼(Larimichthyscrocea)、南方大口鲇(Silurusmeridionalis)和鲻鱼(Mugilcephalus)Cyp19a1b同源性为64.1%～84.4%,但与上述7种鱼性腺芳香化酶(Cyp19a1a)同源性低于63.5%,同源性分析结果与根据传统形态学和生化特征分类的结果相一致。荧光定量PCR结果显示,随处理时间的延长,26℃和29℃组金钱鱼脑垂体中Cyp19a1bmRNA的表达量都逐渐降低,但29℃组显著低于26℃组(P0.05)。以上结果表明:随着卵巢发育或鱼油含量的提高,可降低雌性金钱鱼脑垂体中Cyp19a1bmRNA的表达,这种降低可能是E2反馈调节所致;水温高于26℃将抑制Cyp19a1bmRNA的表达。