嗜水气单胞菌胞外蛋白酶ECPase54的纯化及特性分析

嗜水气单胞菌(Ah)J－1株的液体培养物上清在56℃或与乙二胺四乙酸(EDTA)或丝氨酸蛋白酶抑制剂苯甲基磺酰氟(PMSF)作用，其胞外蛋白酶(ECPase)的活力有不同程度的下降。将酪蛋白掺入丙烯酰胺聚合后，加AhJ－1上清作SDS－PAGE，37℃原位消化，染色，显示上清中存在至少5种分子量不同的蛋白酶。AhJ－1株的培养上清经硫酸铵沉淀、DEAE－纤维素离子交换层析和SephadexG－200分子筛层析，获得一种纯化的蛋白酶。不经2－巯基乙醇处理后，分子量约为54000，而经2－巯基乙醇处理的样品，分子量为35000，且酶活性丧失。该酶对热稳定，EDTA可抑制其活性，PMSF对其无影响。此酶属于热稳定金属蛋白酶(TSMP)，建议命名为ECPase54。它的最适pH为7．5，米氏常数(Km)为1．77mg／ml，对Vero细胞有毒性，腹腔注射能致死小白鼠。