光敏生物素标记犬细小病毒核酸探针的制备及其应用

将含有犬细小病毒2.0kbDNA克隆片段的重组质粒pBI-264转化大肠杆菌JF-803,扩增后用碱裂解法提取重组质粒,纯化后电泳,用冷榨法回收克隆片段。用光敏生物素分别标记重组质粒及克隆片段,制成重组质粒探针及克隆片段探针两种核酸探针,它们对犬细小病毒有相同的杂交特异性,检测灵敏度达pg水平,保存期至少8个月。检测25份犬粪样,阳性率为32%(8/25),而HA-HI试验为24%(6/25),两种方法的符合率为92%(23/25)。本试验从粪样直接提取病毒DNA,用非放射性的光敏生物素标记探针检测,方法简便,可直接应用于兽医病毒学诊断。