白唇竹叶青蛇毒类凝血酶基因的克隆和序列分析

通过分析多种已知的毒蛇蛇毒类凝血酶(SVTLEs)基因序列同源性,以保守的N和C末端氨基酸序列设计引物,克隆得到白唇竹叶青(Trimeresurusalbolabris)SVTLE基因并分析其序列。以毒腺总RNA为模板进行RT-PCR,纯化并克隆至pMD18-T。结果表明，该酶基因大小为777bp；推测出其相应氨基酸序列含258个氨基酸残基,分子量为28.02KD,pI值为6.07；其3个可能糖基化位点为NDT103~105，NNS121~123，NRT251~253；与其它毒蛇的已知SVTLEs基因比较分析，推测出其含6对二硫键即Cys31-162、Cys50-66、Cys98-256、Cys142-210、Cys174-189和Cys200-225；其催化活性中心氨基酸残基为His65、Asp110和Ser204。分子进化树分析表明,毒蛇SVTLEs一级结构的进化具有一定种属特征，可为蛇的系统分类提供参考。