东方蜜蜂微孢子虫30kD蛋白的LC-MS/MS质谱鉴定及分析

在微孢子虫(Microsporidia)侵染宿主的过程中,与侵染相关的蛋白主要分布在30kD左右。本研究分别采用煮沸法、不同浓度碱处理发芽法提取东方蜜蜂微孢子虫(Nosemaceranae)蛋白并通过SDS-PAGE电泳进行比较,发现0.1mol/LKHCO3、K2CO3混合液(pH值为10.7)发芽法提取出的蛋白条带更丰富。回收30kD左右蛋白进行LC-MS/MS质谱测定并检索蜜蜂微孢子虫全基因组预测蛋白数据库,共鉴定获得的269个预测蛋白,匹配COG数据库后进行了蛋白功能分类。结果表明30kD蛋白主要包括翻译转录蛋白、核糖体结构蛋白、修饰蛋白、转化蛋白及分子伴侣等。从中还鉴定到与侵染相关的7种潜在孢壁蛋白(Sporewallprotein,SWP)和3种极管蛋白(Polavtubeprotein,PTP),并对之进行蛋白基因的序列分析,进而发现注释到的PTP1、PTP2和家蚕微孢子虫的PTP1、PTP2具有明显的共线性,其中SWP12的变异度相对较小;结合多重序列比对结果,表明SWP12在东方蜜蜂微孢子虫中是一类较保守的孢壁蛋白。本研究对于蜜蜂微孢子虫蛋白的提取方法比较和侵染相关的后选靶标蛋白的确定具有重要的参考意义。