黄绿蜜环菌SSR-PCR反应体系的优化及引物筛选

以CTAB法提取的黄绿蜜环菌（Armillarialuteo-virens）DNA为模板，应用L16(45)正交实验设计，对Mg2+、dNTPs、引物和TaqDNA聚合酶、模板浓度5种因素进行SSR-PCR反应体系优化，建立了适合黄绿蜜环菌SSR-PCR反应的最佳体系并对退火温度进行检测。结果表明在15μL反应体系中包括1×PCRBuffer，100ng模板DNA，dNTPs217μmol/L，引物0.5μmol/L，TaqDNA聚合酶0.75U，Mg2+1.3mmol/L。稳定性检测证明，该反应体系具有较高的稳定性和重复性，并从34对引物中共筛选出扩增条带清晰、多态性丰富的SSR引物8对。该体系的建立为今后利用SSR标记对黄绿蜜环菌遗传多样性研究、亲缘关系分析及种质资源鉴定等研究提供了依据。