古樟ISSR扩增条件的优化

采用改良CTAB法提取古樟叶片基因组DNA。利用单因素试验设计，对反应体系中退火温度、模板DNA含量、Mg2+浓度、dNTP浓度、引物浓度、TaqDNA聚合酶用量、去离子甲酰胺等7种因素不同梯度对扩增结果的影响进行了比较分析。结果表明古樟ISSR-PCR最佳反应体系为，在20μLPCR反应体积中，含50ngDNA模板，2.5mmol/LMgCl2，0.20mmol/LdNTPS，1UTaqDNA聚合酶，0.5μmol/L引物浓度，2%去离子甲酰胺。该反应体系的建立为今后利用ISSR分子技术对古樟的遗传多样性分析提供了技术支撑。