延边苹果梨苯丙氨酸解氨酶基因克隆及植物表达载体的构建

以苹果梨果皮为试材，根据Genbank上已经登录的蔷薇科植物的PAL核酸序列，利用DNAStar-MegAligan软件进行多序列比对确定它们的保守区，参照西洋梨PAL序列（GenBankDQ230992.2）设计了1对苹果梨特异的PAL引物，运用RT-PCR技术对苹果梨的苯丙氨酸解氨酶（PAL）基因进行了克隆、序列分析及分子进化方面的研究。结果表明试验成功获得了苹果梨PAL基因的全长cDNA序列，命名为PyPAL，GenBank登录号为JQ247318.1。序列分析表明，苹果梨PALcDNA全长2160bp，为完整的开放阅读框，推测其编码719个氨基酸，与鸭梨和西洋梨PAL基因的同源性均高达95%以上，所编码氨基酸序列同源性达95%以上。成功构建了含有？PAL？基因的重组质粒PBI121-PyPAL的植物表达载体，转化到根瘤农杆菌LBA4404菌种中形成工程菌株，为进一步研究苹果梨果实着色调控基因及其遗传改良奠定了基础。