链格孢属小孢子种ISSR和RAPD-PCR最佳反应体系的建立

以13个链格孢属小孢子种菌株为试材，采用正交实验设计的方法，研究Mg2+、dNTPs、TaqDNA聚合酶和引物4个因素在4个水平上对链格孢属小孢子种的ISSR和RAPD反应体系的影响。结果表明链格孢属小孢子种ISSR和RAPD的最佳反应体系为25μL的ISSR-PCR反应体系中，10×PCRBuffer2.50μL，Mg2+？浓度为2.50mmol/L,dNTPs浓度为0.10mmol/L,引物浓度为0.30μmol/L，TaqDNA聚合酶用量为1.25U；在RAPD-PCR反应体系中，10×PCRBuffer2.50μL，Mg2+？浓度为2.00mmol/L,dNTPs浓度为0.15mmol/L,引物浓度为0.60μmol/L，TaqDNA聚合酶用量为1.25U；在此基础上，对最佳反应体系的退火温度进行了筛选确定；在确定退火温度后，采用最佳反应体系，用ISSR引物UBC808和RAPD引物OPE07进行稳定性和通用性验证，结果表明该优化反应体系具有较好的稳定性和通用性。？