杜鹃花ISSR-PCR反应体系的建立和优化

以杜鹃花为试验材料，采用正交实验方法，研究模板DNA浓度、ISSR引物浓度、dNTPs浓度、TaqDNA聚合酶浓度、Mg2+浓度等5个因素对ISSR-PCR反应体系的影响，以建立适合杜鹃花的ISSR-PCR最佳扩增体系。结果表明杜鹃花ISSR反应体系的最佳条件为模板DNA用量为60ng/20μL，ISSR引物浓度0.60μmol/L，dNTPs浓度0.50μmol/L，TaqDNA聚合酶浓度30U/mL，Mg2+浓度为0.6mmol/L。采用该反应体系可以从10份杜鹃花(R.simsii)基因组内扩增出稳定性高、重复性好ISSR-PCR产物。该研究为杜鹃花的遗传多样性分析、ISSR指纹图谱构建、亲缘关系鉴定等研究奠定了基础。？