百合病毒检测芯片的杂交条件优化

分别以感染百合无症病毒、黄瓜花叶病毒和百合斑驳病毒的百合及感染烟草花叶病毒和马铃薯病毒Y的烟草为试材，根据5种植物病毒外壳蛋白基因保守序列设计引物和寡核苷酸探针，并制备基因芯片。用Trizol试剂盒提取感染病毒的植物总RNA，荧光RT-PCR产物与芯片杂交，研究PCR产物是否进行变性处理、杂交时间、杂交温度、杂交液组分SSC和SDS浓度及PCR体系中非荧光引物和荧光引物比例对芯片杂交的影响。结果表明杂交适宜条件为6×？SSC、0.2％SDS的杂交液、42℃杂交60min，PCR体系中非荧光与荧光引物比例为1∶10，PCR产物要进行变性处理。经过整体条件优化后的基因芯片在杂交检测上具有较高的特异性，适于检测百合病毒病。？