加工番茄PCR-SSCP分子标记体系的建立与优化

以加工番茄为试验材料，采用PCR-SSCP分子标记技术，对DNA提取方法、PCR反应程序、聚合酶链式反应-单链构象多态性分子标记体系的电泳条件、变性剂等诸多因素进行了研究，筛选和建立了多态性检出率高、带型清晰、重复性好的PCR-SSCP反应体系和反应程序。结果表明采用CTAB法提取番茄叶片DNA时，在CTAB缓冲液中加入5mol/LNaCl，第一次抽提离心速度和离心时间分别为8000r/min和15min，可以获得高质量的DNA，PCR扩增程序为94℃5min，94℃1min，52℃30s，72℃1min，72℃10min，29个循环，退火温度52℃，引物大小100~300bp、98℃变性10min，非变性聚丙烯酰胺凝胶浓度8%，电泳1.5~2.5h，聚丙烯酰胺凝胶中不添加甘油为加工番茄PCR-SSCP分子标记体系最佳的条件组合。？